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细胞培养常见问题分析(1)
发布时间:2020-04-24
浏览次数:309 次

1. 冷冻管应如何解冻? 

取出冷冻管后, 须立即放入 37 ℃水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在 1 分钟

内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由

液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。

2. 细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除 DMSO?

除少数特别注明对 DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在

解冻之后, 应直接放入含有 10-15ml 新鲜培养基之培养角瓶中, 待隔天再置换新鲜

培养基以去除 DMSO 即可, 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基?

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提

供之培养条件不同之培养基, 细胞大都无法立即适应, 造成细胞无法存活。

4. 可否使用与原先培养条件不同之血清种类?

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源, 所以血清的种类和品质对于

细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容

物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5. 何谓 FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和 FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 两者都

是指胎牛血清, FCS 乃错误的使用字眼, 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指

小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。

6. 培养细胞时应使用 5 % 或 10% CO2?或根本没有影响? 2

一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统, 而培养基中 NaHCO3

的含量将决定细胞培养时应使用的 CO2 浓度。当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g

时,细胞培养时应使用 10 % CO2;当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时, 则应使用

5 % CO2 培养细胞。

7. 何时须更换培养基?

视细胞生长密度而定, 或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即

可。

8. 培养基中是否须添加抗生素?

除于特殊筛选系统中外, 一般正常培养状态下, 培养基中不应添加任何抗生素。

9. 附着性细胞继代时所使用之 trypsin-EDTA 浓度?应如何处理?

一般使用之 trypsin-EDTA 浓度为 0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶

后应立即少量分装于无菌试管中, 保存于–20 ℃,避免反复冷冻解冻造成 trypsin 之

活性降低, 并可减少污染之机会。

10. 悬浮性细胞应如何继代处理?

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中, 稀释细胞浓度即可, 若培养液

太多时, 可将培养角瓶口端稍微抬高, 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细

胞之培养液至另一新的培养角瓶, 加入新鲜培养基稀释至适当浓度, 重复前述步骤

即可。 ! E7 q. r; _# I2 [

11. 欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?

欲回收动物细胞, 其离心速率一般为 300xg (约 1,000rpm),5 - 10 分钟, 过

高之转速, 将造成细胞死亡。

12. 细胞之接种密度为何? + l+ M! p: t* R1 ~3 _! z

依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀

释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。


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