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细胞培养常见问题分析 (3)
发布时间:2020-04-24
浏览次数:309 次

25. 购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?

研究人员在细胞培养时出现存活率不佳, 常见原因可归纳为:培养基使用错误或

培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,

加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80℃

太久。

26. 收到之冷冻管瓶身破裂,瓶盖有裂纹,或瓶盖脱落之原因?

冷冻管瓶盖裂纹,或瓶身破裂,可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当,造成

冷冻管裂损,建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱,乃因热胀冷缩之

物理现象,冷冻管有可能因此而造成细胞污染,故冷冻管于放入和取出液氮桶时,均

应立刻将冷冻管再一次扭紧 。

27. 如何选用特殊细胞系培养基?

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞,很可能在 DMEM 或

M199 中同样很容易生长。总之,首选 MEM 做粘附细胞培养、RPMI-1640 做悬浮细胞培

养是一个好的开始,各种目的无血清培养最好首选 AIM V(12005)培养基(SFM)。

28. L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的

能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降

解,但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对

于一些细胞具有毒性。

29. GlutaMAX-I 是什么?培养细胞如何利用 GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?

GlutaMAX-I 二肽是一个 L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的 alpha-氨基用 L-丙氨

酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放 L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I 二肽非常

稳定,即使在 121 磅灭菌 20 分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同

条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。

30. 什么培养基中可以省去加酚红? p

酚红在培养基中被用来作为 PH 值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性

时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免

固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰

检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。 31. 培养基中

丙酮酸钠的作用是什么?

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,

但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。

32. 二价离子抑制胰蛋白酶活性吗?使用胰蛋白酶时加入 EDTA 的目的是什么? 细胞培养文献

广州东锐科技有限公司 020-87761680 87761661 87761636 87761665 7

二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保

持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前,用 EDTA 清洗细胞,以消除来自培

养基中所有的二价离子。 - ~# @6 \; l6 w* ^

33. 书上说,Hank‘s 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用,不需要 CO2 培养箱。原因是

什么?Hank’s 平衡盐溶液(HBS)和 Earle‘s 平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差

别?

HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在 Eagles (2.2g/L)中比在 Hanks

(0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡,以维持溶液的 PH 值。Eagles 液在

空气水平的 CO2 中,溶液会变碱,Hanks 液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在 CO2

培养箱中保存组织,需要用 Eagles 液,。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的

组织,用 Hanks 液就可以了。

血清


34. 保存血清最好的方法?

建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放于 4℃时,请勿超过一个月。若您

一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。35. 如

何解冻血清才不会使产品质量受损?

建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于 2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之

全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

36. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?( R. r+ k5 |" i- S7 k

血清中沉淀物的出现有许多种原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性

所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦

是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。若欲

去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以 400g 稍微离心,上清液即

可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因

为它可能会阻塞您的过滤膜。

37. 为什么要热灭活血清?

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞

和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养 ES 细胞,昆虫细

胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。


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